20世紀90年代初,朱紅等發(fā)表了冰核菌種凍干的研究。冰核細菌大量附生于植物表面,并在-2~-5℃以下具有很強的冰核作用,在人工降雨降雪、人工制冰和生物免疫學檢測方法中有很高的應用價值。朱紅等人對冰核菌種的5種保存方法進行了比較研究。其中IHM4菌株的實驗結果列于表5-6。
表5-6數(shù)據(jù)表明,對于IHM4冰核菌種,考慮存活力和冰核活力兩個因素,冷凍干燥保存與滅菌水保存效果相當。但凍干后更方便儲運,而滅菌水保存更為經(jīng)濟。該項研究沒有給出具體的凍干工藝參數(shù)。
為長期有效保存鼠疫菌種,使其不失原有的生物學特性,鄭星銘等早在1997年就進行了鼠疫菌種的凍干研究,給出凍干工藝?;罨木N接種于溶血赫氏瓊脂斜面,28℃培養(yǎng)40h。將培養(yǎng)后的菌種研磨分散于1.5mL滅菌脫脂牛乳中,再分裝在10支安甑中,每支約0.2mL、3~4mm高。為確保鼠疫菌種不被抽出,防止污染環(huán)境,每支安瓿的管口用滅菌脫脂棉松塞。將安瓿豎立在專用鋁盒內(nèi),送入已經(jīng)降溫至-30℃的凍干箱內(nèi)預凍。預凍1h后,繼續(xù)降溫2h后達-55℃。開啟真空泵,升華干燥。干燥后加熱升溫至30℃,維持4~6h。工藝曲線見圖5-4。菌種凍干后,放入帶有吸濕劑的干燥罐內(nèi),抽真空后封口保存。鄭星銘的研究報告中強調(diào),凍結溫度要低于牛乳的共晶點(-16℃)5~10℃,保證凍實。降溫速率為10~15℃/h。第一干燥階段除去90%以上的水分。第二干燥階段除去結合水,溫度相對要高,但不可高于30℃,以免影響制品的穩(wěn)定性和活性。
麻疹病毒在液態(tài)下不穩(wěn)定。多年的研究表明,麻疹病毒加入保護劑凍干后,穩(wěn)定性明顯改善。徐斌等通過正交實驗研究了麻疹減毒活疫苗的凍干工藝。首先用電阻法測定麻疹減毒活疫苗的共晶點溫度為-26℃。設計的正交實驗因素水平見表5-7。
注:升華干燥E2過程,制品的溫度始終控制在31℃以下。
實驗研究中每次分裝1800支、0.6mL/支麻疹減毒活疫苗進行凍干實驗,然后對凍干制品進行水分、滴度、熱穩(wěn)定性檢測,并計算干損率。實驗研究的結果表明,優(yōu)化的麻疹減毒活疫苗凍干工藝參數(shù)列于表5-8。以優(yōu)化的麻疹減毒活疫苗凍干工藝凍干的制品成型良好,干損率平均為1.36%,穩(wěn)定性好,殘余水分在1.62%~1.67%之間。優(yōu)化的麻疹減毒活疫苗凍干工藝適合麻疹疫苗大規(guī)模生產(chǎn)。